玫瑰花结试验rosette test

系一种免疫试验。是用红细胞为指示细胞检测受检者血液或淋巴器官中某种细胞的数量及所占比例。当受检细胞的表面抗体能针对指示细胞的相应抗原结合时，或受检者细胞某种特有受体与指示细胞的相应配体相结合时，均出现以受检细胞为中心，周围与指示细胞相结合的花结状。常用玫瑰花结试验有3种：E玫瑰花结试验，多用于检查T淋巴细胞；EA玫瑰花结试验，多用于检测T淋巴细胞亚群；EAC玫瑰花结试验，用于检查B细胞，并用于分离B、T细胞。

玫瑰花结试验

玫瑰花结试验是以红细胞为指示细胞来检测受检者血液中或淋巴器官中的某种细胞的数量和所占比例的试验。其基本原理是：
❶受检细胞具有某种特有的受体，而指示细胞上带有其相应的配体，受体与其相应的配体相结合形成受检细胞在中央、指示细胞粘附于其周围的细胞团，该细胞团可用光学显微镜加以鉴别；
❷受检细胞表面带有针对指示细胞的免疫球蛋白（抗体），抗体与其相应的抗原（指示细胞）结合，也形成受检细胞在中央、指示细胞在其周围的细胞团，形如玫瑰花状，可用光学显微镜加以鉴别。试验结果以(玫瑰花结阳性细胞数/受检细胞总数)×%，以及玫瑰花结阳性细胞数/ml （血液）表示。
根据所利用的受检细胞表面标志的差异，常用的玫瑰花结试验主要有三种。
❶E玫瑰花结试验：用未结合其他指示物质的红细胞，检测带有红细胞受体的细胞。
❷EA玫瑰花结试验： 使红细胞与其相应抗体相结合，形成红细胞和抗体的复合物(EA)，再用EA检测带有免疫球蛋白的Fc受体的细胞。
❸EAC玫瑰花结试验： 系将小鼠补体结合于EA，形成红细胞抗体补体复合物 (EAC)，以EAC检测带有补体成分C3b受体的细胞。目前，E玫瑰花结试验多用于检测T细胞，EA玫瑰花结试验多用于检测T细胞亚群，EAC玫瑰花结试验用于检测B细胞。在研究工作中，E玫瑰花结试验和EAC玫瑰花结试验还用于分离T细胞和B细胞。
此外还有联合玫瑰花结试验和免疫玫瑰花结试验。联合玫瑰花结试验是同时使用E和EA检测带有E受体和Fc受体双标志细胞的试验。免疫玫瑰花结试验是用绵羊红细胞检测产生抗红细胞抗体的小鼠脾细胞的试验。E玫瑰花结试验 未经任何药物或免疫活性物质处理的T细胞，在体外4～29℃条件下能天然地与绵羊红细胞(SRBC)结合，形成T细胞在中央、绵羊红细胞（至少三个以上）粘附于其表面的细胞团，呈玫瑰花状，称为E玫瑰花结(E指erythrocyte——红细胞)。T细胞之所以能与SRBC天然结合，是因为T细胞表面具有一类能与SRBC表面糖肽相结合的受体，称为E受体。E受体是一种糖蛋白。用常规方法观察不到人类的B细胞和单核细胞表面有E受体。因此E受体可以作为T细胞所特有的表面标志。利用T细胞的E受体，能形成E玫瑰花结而设计的试验，称为E玫瑰花结试验。根据试验方法的差别，E玫瑰花结试验分为若干类，例如检测T细胞总数的总数E玫瑰花结试验、检测T细胞一个亚群的活性E玫瑰花结试验和检测未成熟T细胞的稳定E玫瑰花结试验等。
试验时应严格掌握实验条件。因试验条件的不同对结果影响较大，所以各家报道的正常值颇不相同。
临床上用该试验测定外周血中的T细胞数，一般是以百分率(T细胞与淋巴细胞总数之比)表示，也可以绝对数表示。这里仅提供正常人外周血各类E玫瑰花结的常见百分率的参考值及其意义。

正常人外周血E玫瑰花结百分率参考值

E玫瑰花结种类	检测条件	外周血百分率	意 义
总数E玫瑰花结 活性E玫瑰花结 稳定E玫瑰花结	4℃2小时 即刻 37℃30分钟	65% 25% 3%以下	T细胞总数 T细胞的一个亚群 未成熟的T细胞

通过这一试验可以观察受检者的细胞免疫功能及免疫增强剂的初步疗效，也可以用玫瑰花结抑制试验观察免疫抑制剂的效果。原发性及继发性的细胞免疫缺陷，如细胞体液联合免疫缺陷病或恶性肿瘤晚期患者外周血中T细胞数较正常者低。在研究工作中，可以用该技术分离出较纯的T细胞和B细胞，也是一种简便可行的方法。
EA玫瑰花结试验 人体的K细胞、单核细胞、部分B细胞以及某些T细胞表面具有IgG的Fc受体，某些T细胞表面带有IgM的Fc受体。这些细胞与结合了相应抗体的某些红细胞 (绵羊红细胞、Rh0 + O型人红细胞、牛红细胞及鸡红细胞等)相遇时，即与Fc分段结合，而形成红细胞粘附于具有Fc受体的细胞表面的细胞团，呈现玫瑰花状，称为EA玫瑰花结(E指erythrocyte——红细胞，A指antibody——抗体)。利用某些细胞具有Fc受体，能形成EA玫瑰花结而设计的试验，称为EA玫瑰花结试验。
外周血的EA玫瑰花结形成细胞的百分率与表面膜球蛋白阳性细胞的百分率之间无平行关系，不能以EA玫瑰花结形成细胞的百分率来表示B细胞的数量。EA玫瑰花结试验，目前主要用于科研工作，用以观察、鉴别和分离具有Fc受体的T细胞亚类以及它们在正常人和病人体内的分布及其与其他免疫活性细胞之间的关系。人淋巴细胞与绵羊红细胞以及鸡EA （被抗体致敏的鸡红细胞） 三种成分混合之后，可同时呈现出E玫瑰花结、EA玫瑰花结以及E-EA双标记玫瑰花结。有的淋巴细胞不形成任何玫瑰花结，这种细胞称裸细胞 (N细胞)。E-EA双标记玫瑰花结形成细胞是具有Fc受体的T细胞，称为双标记细胞(D细胞)。
EAC玫瑰花结试验 经相应抗体致敏的红细胞与预先用该红细胞吸收过的人或小鼠的新鲜血清（内含补体）共同孵育后形成EAC (E指erythrocyte——红细胞，A指antibody——抗体，C指complement——补体)。人类B细胞和单核细胞表面具有人和小鼠补体成分C3b的受体。当EAC与淋巴细胞悬液共同孵育时，EAC以其C3b成分与上述细胞上的C3b受体结合，红细胞结合于具有C3b受体的细胞表面上呈玫瑰花状，称为EAC玫瑰花结。利用某些细胞具有C3b受体，能形成EAC玫瑰花结而设计的试验，称为EAC玫瑰花结试验。
EAC玫瑰花结试验中所用的红细胞以牛红细胞为好，它不容易发生自凝。如用绵羊红细胞，花结形成后应加以振荡或经37℃孵育，以免绵羊红细胞与T细胞形成E玫瑰花结而与EAC玫瑰花结相混淆。EAC玫瑰花结细胞间结合牢固，振荡或37 ℃孵育后细胞团不致离散。小鼠血清中缺乏补体C5成分，不引起抗体致敏的红细胞裂解，故常用于EAC玫瑰花结试验。
EAC玫瑰花结试验用于测定外周血或淋巴组织中具有C3b受体的B细胞数。正常人外周血中EAC玫瑰花结形成细胞百分率为13～25%。慢性淋巴细胞白血病及全身性红斑狼疮等患者外周血中EAC玫瑰花结形成细胞增多。