放射免疫测定radioimmunoassay,RIA

将抗原抗体反应的特异性与同位素示踪技术的敏感性相结合的一种免疫分析技术。可精确地测定体液中激素、酶等微量活性物质，其灵敏度达ng至Pg水平，是有机物定量分析的一次重大突破。雅洛(R. Yalow)因创立放射免疫法，于1977年获诺贝尔生理学或医学奖。
原理 有液相法、固相法二类。液相法的原理是利用放射性同位素标记抗原(^*Ag)和非标记抗原(Ag)对特异性抗体的竞争抑制反应（见图）。

竞争性放射免疫测定示意图

在这一反应系统中，*Ag与Ag竞争性地与Ab结合，当系统中^*Ag和Ab量一定时，结合型^*Ag-Ab(B)和游离型^*Ag(F)的量分别与Ag的量呈负相关和正相关，B/F值或B%与Ag浓度呈双曲函数关系。用已知浓度的标准物(Ag)与一定量^*Ag和Ab反应，待反应平衡后，将反应液中的B和F分开，分别测定B和F的放射性，计算出不同浓度Ag的B/F值或B%，以标准物Ag的浓度为横座标，B/F值或B%为纵座标即可绘成竞争性抑制反应的标准曲线。用同样方法测出待检Ag的B/F或B%，在标准曲线上查出其含量。固相法的原理类似酶联免疫测定，只是以同位素代替酶作为标记物。
本法常用的标记同位素有3H、125I和130I等。方法 ❶液相放射免疫测定： 按平衡饱和法或顺序饱和法加样，使待测抗原与标记抗原竞相与抗体结合或顺序结合，反应平衡后，利用吸附法、化学沉淀法、双抗体沉淀法、微孔滤膜法、电泳、层析、凝胶过滤等分离技术，将B和F分开，分别测出B和F的脉冲数，计算B/F值或B%等，在标准曲线上查出待测抗原的含量；
❷固相放射免疫测定，将抗原或抗体预先联接在固相载体 （聚苯乙烯或硝酸纤维素等）上，制成免疫吸附剂，竞争性和非竞争性免疫反应与分离B和F在同一管内进行，然后分别测出其脉冲数，从而计算出待测物的含量，其方法有单层竞争法、单层非竞争法、多层竞争法、多层非竞争法和双抗体固相法等；
❸放射对流免疫电泳，将放射免疫测定与对流电泳相结合，有竞争法、顺序加样法和抑制法等，具有简便快速的优点。
应用 RIA具有特异性强、灵敏度高、准确性和精密度高、便于标准化等优点，用于各种抗原和半抗原的检测，尤以对小分子痕量物质的超微定量，远非常规的有机分析方法所可比拟，此法已在生命科学研究的一切领域中广泛应用，在疾病诊断方面，除可以用于传染病、寄生虫病等由外来抗原引起的疾病诊断外，还可广泛用于各种内分泌疾病、心血管疾病、肿瘤及其它多种普通病的诊断。更可广泛用于检测动物、植物、寄生虫、细菌和病毒等体内的各种激素、酶、细胞内信使物质，其它活性物质及其微量结构成分。用RIA来测定各种药物的有效成分含量也已广泛采用。

放射免疫测定radioimmunoassay,RIA

将抗原抗体反应的特异性与同位素示踪技术的敏感性相结合的一种免疫分析技术。可精确地测定体液中激素、酶等微量活性物质，其灵敏度达ng至pg水平，是有机物定量分析的一次重大突破。有液相法和固相法两类。液相法的原理是利用放射性同位素标记抗原(^*Ag)和非标记抗原(Ag)对特异性抗体的竞争抑制反应；固相法的原理类似酶联免疫测定，只是以同位素代替酶作为标记物，常用的标记同位素有³H 、¹²⁵I和¹³⁰I等。此法已在生命科学研究中广泛应用，在疾病诊断方面，除可用于传染病、寄生虫病等由外来抗原引起的疾病诊断外，还可广泛用于各种内分泌疾病、心血管疾病、肿瘤及其他多种普通病的诊断。更可广泛用于检测动植物、寄生虫、细菌和病毒等体内的各种激素、酶、细胞内信使物质，其他活性物质及其微量结构成分。用RIA来测定各种药物的有效成分含量也已广泛采用。

放射免疫测定

放射免疫测定与其他体外放射免疫技术一样，是放射性同位素示踪法在免疫学领域中体外应用的一种特殊形式。同位素示踪法具有很高的灵敏度，而抗原抗体的免疫化学反应具有较高的特异性，两者结合就是放射免疫测定。放射免疫测定兼具二者之长，已成为发展迅速、用途广泛的一项定性、定量和定位的研究和诊断技术。其中发展最快、用途最广的是放射免疫分析、双抗体放射免疫法和放射免疫吸收试验等。同位素技术与一般单向环状扩散试验结合即为放射单向环状扩散法，与免疫电泳技术结合即为放射免疫电泳。用于测定抗原、抗体结合部位和数量的技术称为亲和标记，而法尔技术则是用于测定抗体绝对量或者说是抗原结合能力的一种放射免疫技术。
放射免疫测定的技术关键是抗原、抗体特异性要高，活性要好，标记后放射性要高。选用适当的放射性同位素标记抗原(Ag*)，并与限定量的抗体(Ab)结合形成可逆的Ag^*-Ab复合物。此结合物中的结合抗原称B(boundAg*)，而未与Ab结合的游离抗原称F(free Ag*)。在此系统中，如加入待测的非标记Ag，则Ag*与Ag共同竞争此限量抗体，最后达到平衡状态。加入的Ag愈多，Ag*与Ab结合就愈少。也就是说，被测样品中的Ag竞争性地抑制了Ag^*与Ab的结合，故也称竞争性放射免疫分析或放射免疫饱和分析。用适当方法 （如凝胶过滤等）分离出B和F，测其放射性。以已知量的标准抗原浓度为横坐标，与其浓度相应的B/F或B/(B+F)为纵坐标，制得标准曲线，从标准曲线即可查出待测样品Ag的浓度。
放射免疫测定已广泛用于各种激素、肿瘤相关抗原(AFP,CEA)、药物(地高辛、吗啡等)、病毒抗原(HBs-Ag)及免疫球蛋白、cAMP、cGMP等的测定。灵敏度可达10-9～10-15g/ml水平，是目前最灵敏的分析法，且已可自动化，但需一定仪器设备，流程也较长。

放射免疫测定radioimmunoassay,RIA

是用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术。它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性相结合，使检测的敏感度达pg水平。常用于标记的放射性核素有¹²⁵I和¹³¹I，采用的方法分液相法和固相法两种。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素，吗啡、地高辛等药物以及IgE等。