抑菌圈测定法detection of inhibition zone

通过药剂在含菌培养基平面上水平扩散，形成大小不同的抑菌圈来比较毒力的杀菌剂生物测定方法。形成抑菌圈的方法有以下几种。
管碟法 在含菌培养基平面上放置一定大小的不锈钢圈，在其中滴加药液，通过药剂水平扩散形成大小不同的抑菌圈来比较药剂毒力。目前国际上将此法定为抗菌素效价测定的标准方法。此外还用于抗菌素类药剂的筛选、定性定量分析和在动植物体内残留量的测定方面。
滤纸片法 将一定大小蘸有药液的小滤纸片，放在含菌培养基平面上，因药剂的扩散作用形成不同的抑菌圈，以此比较药剂的毒力。此法是杀菌剂生物测定中应用最广泛的方法之一，主要用于抗菌物质的筛选、药剂在植物体内残留测定及药剂变质和组分差异的测定。是把定量滤纸用打孔器打成直径6～ 8毫米的小片，经灭菌后浸蘸含有抗菌物质的不同浓度的稀释液或用滴管将一定量的微量药液滴在小滤纸片上，晾干后置于含菌培养基平面上。适温培养一定时间后，由于药剂的渗透和扩散作用即形成抑菌圈。根据抑菌圈直径（或直径平方）与药剂浓度对数成函数关系，绘出药量—反应毒力回归线。在一定浓度范围内，以抑菌圈直径为纵轴，以药剂浓度对数值为横轴画出直线。测定时根据标准药剂的标准曲线来比较所测药剂的毒力或进行定性定量分析。
孔碟法 在含菌培养基上直接打孔，药液滴于小孔内，通过药剂的扩散而形成大小不同的抑菌圈来比较药剂的毒力。一般是用打孔器在凝固后的培养基平面上打孔，也可将不锈钢杯放于培养皿内，然后在培养皿内倒入含菌培养基液，凝固后取出不锈钢杯，使培养基平面留下小孔。
洋菜柱法 将含有药剂的洋菜柱放于含菌的培养基平面上，因药剂的水平扩散而形成抑菌圈，根据抑菌圈大小不同来比较药剂的毒力。洋菜柱的制作为，将一定浓度的药液与一定量熔化后的培养基混合，放于培养皿内，凝固后用打孔器打取一定大小的洋菜柱即可。
滴下法 利用注射器、毛细管等器具，将药液直接滴加在含菌培养基平面上，培养一定时间后，根据抑菌圈大小不同来比较药剂毒力的方法。
注意事项 采用抑菌圈法应注意四方面： ❶所用器具应严格灭菌和无菌操作；
❷所用培养皿底面要平，每次测定时培养基用量应一定，以免影响抑菌圈质量；
❸为使药剂充分扩散，可把滴加药剂的培养皿在5℃冰箱中放置4～6小时，以便形成边缘更清晰的抑菌圈；
❹含阳离子的无机化合物不宜用滤纸片法测定，因为滤纸片带有阴离子，易同药剂发生化学反应，影响测定结果。(见彩图28)