供试病原菌培养incubation of pathogenousorganisms

在室内提供适宜的营养基质、温度、光照、通气等条件，使有致病力的植物病原体得以正常生长和繁殖，为杀菌剂筛选、毒力测定及其他有关药理、毒理试验提供足够数量菌龄一致、生理活性一致的试材；为盆栽试验和田间药剂试验提供接种用的纯净病原菌。
供试病原菌选定 一般药剂筛选，应选择对营养和其他培养条件要求不严、容易生长繁殖、经较长期的培养不易发生变异，并且在分类系统中有一定代表性的病原菌。药效试验则多用当地重要的作物病原菌。各国选用的供试病原菌种类不尽相同，常见的有：致病疫霉菌(Phytophthora infestans)、古巴假霜霉菌(Pseudo-peronospora cubensis)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、麦类白粉菌(Erysiphe graminis)、稻梨孢菌(Piriculoryzae)、灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、围小丛壳菌(Glomerella cingulata)等真菌；稻黄单孢杆菌(Xantho-monas oryzae)等细菌。
培养方法 培养方法依不同病菌而异，基本原则是，从新鲜的植物病组织上分离得纯净菌种，培养时尽可能给予病菌最适生长繁殖条件。培养的基本设备有：电烘箱、高压灭菌器、生化培养箱(定温、定湿、定光照)、冰箱、无菌操作室或超净工作台、温室或植物生长箱以及试验室常备的称量用具、制作培养基和培养病菌所用玻璃器皿等。几种常用的供试病原菌的培养方法如下：
致病疫霉菌培养 致病疫霉菌是重要的植物病原真菌。一般用其菌丝体和孢子囊（或游动孢子）作为药剂测定的材料。温度18～20℃时，此菌在普通马铃薯蔗糖洋菜(PSA)培养基上能够生长。如果需要较多的孢子囊则用天然培养基如菜豆(Phaseolus limensis)培养基，豌豆 (Pisum sativum)粒培养基等。为避免长期培养后，菌的生活力和致病力衰退，可以用感病的马铃薯品种植株或薯块接菌培养。
菜豆培养基培养 50克菜豆以500毫升水浸10小时，磨浆，加15克熔化的洋菜，再加水至1升，灭菌。
豌豆粒培养基培养 成熟干豌豆以水浸泡过夜，放入三角瓶中，铺陈2～3厘米厚，加水至刚没豆粒，灭菌备用。以纯净菌接种豆粒后，置20℃经10天，加少许水，再培养2～3天，能产生大量孢子囊和游动孢子。
马铃薯植株或薯块接菌培养 在无杂菌的条件下，将致病疫霉菌游动孢子蒸馏水悬浮液喷在马铃薯植株叶片上，或用棉花球蘸孢子悬浮液接种至叶背面，18 ℃条件下充分保湿12小时，经4～5天可产生孢子囊。如用薯块，则将薯块表面灭菌后，切一深刀口，将新鲜菌种接入切口，用橡皮筋扎紧切口防止干燥，贮放在13℃条件下。当试验用菌时，将病薯切成小薄片，放在培养皿中湿滤纸上，18℃培养4～5天，薯块上即产生大量孢子囊。用蒸馏水浸泡以收集孢子囊。在13℃时，经30～60分钟可释放出游动孢子。此菌对铜等离子敏感，所以常用重蒸馏水配制孢子囊悬浮液。
立枯丝核菌培养 寄主范围广，是重要的病原真菌。此菌不产生分生孢子，一般用其菌丝体或由菌丝体形成的菌核做试材。室内测定用菌，在普通马铃薯葡萄糖（或蔗糖）洋菜培养基(PDA或PSA)上，25℃左右温度，生长良好并形成菌核。如供盆栽或田间试验接种土壤用菌，则用燕麦（或大麦）粒培养基或玉米粉砂培养基。
燕麦（大麦）粒培养基培养 燕麦（大麦）粒加适量水，灭菌。接菌后置25℃培养2～3星期，可供接种用。如将有菌麦粒摊在纸容器中，28℃下晾干，然后贮存在纸袋或金属容器中，在 ℃下保存，菌的活力和致病力可保持几年不衰退。
玉米粉砂培养基培养 粗玉米粉20克，砂980克，蒸馏水250毫升，混合后灭菌。或用粗玉米粉与蛭石按重量1∶9混合，加20%水（体积比），灭菌。接菌后，25℃下培养20～40天。晾干后，按重量比1∶4与土混匀备用。
稻梨孢菌培养 稻梨孢菌是为害水稻的重要病原真菌。用其菌丝体和分生孢子做试材。此菌不同菌株产生孢子的能力有差别，适用的培养基也有所不同，要通过试验优选培养基。常用稻麸皮洋菜培养基或淀粉培养基。如需用大量分生孢子，则用大麦粒或高粱粒培养基。
稻麸皮洋菜培养基培养 稻麸皮20克、洋菜10克、蒸馏水1000毫升，高压灭菌。在培养基上接菌后，置26℃培养。
淀粉培养基制备 可溶性淀粉10克、酵母浸膏2克、洋菜15～17克、水1000毫升，高压灭菌。
大麦粒培养基培养 大麦粒12克放三角瓶内，加蒸馏水15～20毫升，灭菌。接种稻梨孢菌，在26℃下培养1～2天。待麦粒上生长菌丝体，充分摇动，使麦粒散开。再在26℃下培养一星期左右，麦粒上长满菌丝体和孢子。每瓶加清水60毫升洗下孢子，用纱布过滤后备用。洗过的麦粒除去多余的水，摊在培养皿内，避免杂菌污染，麦粒上又能形成大量孢子。
高粱粒培养基培养 白高粱粒在水中浸12小时。取水浸种子160克，盛三角瓶内，加水20毫升，高压灭菌2次。接菌和洗孢子方法同大麦粒培养基。
灰葡萄孢菌培养 为广谱植物病原真菌，用其菌丝体或分生孢子做试验。在马铃薯、蔗糖、琼脂培养基上，18℃培养，能够生长菌丝，形成分生孢子。如需要大量孢子，则采用洋葱叶培养基。在培养皿内铺陈干洋葱叶，其上倒入含2%洋菜的水液，灭菌20分钟。洋菜液凝固后接菌。置18℃ 7～10天。每天以荧光灯照14小时。
围小丛壳菌培养 寄主种类很多。以菌丝体或分生孢子为试材。在PDA或PSA培养基上能生长并产生分生孢子。胡萝卜汁洋菜培养基更适于产生分生孢子：用胡萝卜汁125～750毫升、洋菜15克，水加至1升，调节至pH5.1～5.5，灭菌，加链霉素或青霉素100毫克。培养基表面接种浓孢子悬浮液，25℃培养，每天光照12小时。
古巴假霜霉菌培养 此菌很难在人工培养基上培养，应在盆栽或试管培育的寄主植株上接种染病以繁殖病菌。自田间采集有病黄瓜叶，在21℃左右保湿12～24小时，促使病斑上形成较多的孢子囊。用水洗下孢子囊制得悬浮液。接种至一片真叶期的健康黄瓜幼苗，保湿一夜。待发病后，病斑上长出孢子囊，可收集供测定或接种用。
麦类白粉病菌培养 采集田间感病麦叶上的分生孢子，接种在盆栽感病小麦苗或试管培植的麦苗上，适当保湿（叶片上不要聚集水滴）,20℃左右下培养。试管中麦苗发病后，放2～4℃，有日光灯照明的冰箱中，可以保存4～6星期。如定期转管接种，保存期还可延长。
稻黄单孢杆菌培养 此菌是植物病原细菌。常用两种培养基制备：❶牛肉浸膏3克、葡萄糖2.5克，胨5克、洋菜15克、水1升，灭菌。
❷牛肉浸膏3克、胨5克、K₂HPO₄2克、KH₂PO₄ 0.5克、洋菜15克、水1升，灭菌。灭菌后，加50毫升灭菌的10%葡萄糖溶液和1毫升浓度1摩/升的MgSO₄·7H₂O，调整至pH7.2。接菌后，置25～30℃培养，3～5天后生成典型菌落。