β-地中海贫血的基因诊断gene diagnosis of β-thalassemia

(1)DNA检测与分析：
❶RCR/ASO探针法：是β-地贫基因诊断最主要的途径。根据β珠蛋白基因主要的突变位点，设计合成2对寡核苷酸引物，用PCR法分别扩增β-珠蛋白基因两个片段（这两个片段中包含了上述可能发生的突变）。针对上述每种突变位点，分别合成两个寡核苷酸探针（正常探针与突变探针），然后分别进行斑点杂交。
❷PCR/RFLP连锁分析法：适用于β-地贫高危胎儿的产前诊断。已知在β珠蛋白基因的5′处有一限制酶^*HgiAI的多态性位点，在中国人中的频率为0.5，是一个很好的遗传标记。通过PCR扩增包括这一限制酶位点在内的110bp的β珠蛋白基因片段，然后用HgiAI消化，具有多态性位点的扩增片段可被切割成65+45bp两种片断，经过凝胶电泳分离后可直接观察到这些酶解片段，然后在家庭中进行RFLP连锁分析，即可对β-地贫危险胎儿进行产前诊断。
❸DNA芯片^*技术：针对β-地贫每种基因突变的位点，分别合成两种寡核苷酸探针^*，以显微打印的方式将所有探针固化在支持物上，通过一次杂交即可快速、简便地检测出所有突变。(2)RNA检测与分析：应用PCR技术介导的mRNA定量测定方法不仅可以诊断β-地贫，还可准确诊断β-地贫的杂合子。