高粱籽粒中单宁含量的测定

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高粱中的单宁含量是高粱品质的重要指标。单宁类化合物在碱性溶液中能还原磷钼酸-钨酸钠并使溶液成为蓝色。蓝色深浅与单宁含量成正比。因此可用比色法测定单宁含量。

(一)试剂配制

1．F-D(Folir-Denis)试剂 在750ml蒸馏水中加入钨酸钠(Na₂Wo₄·2H₂O)100g，磷钼酸(H₃PMo₁₂O₄₀)20g及磷酸50ml，置沸水浴上回流2h，冷却稀释至1L。

2．碳酸钠饱和溶液 35g无水碳酸钠，在70－80℃下溶解于100ml蒸馏水中，放置过夜。次日用少许Na₂CO₃·10H₂O结晶干粉，作为晶种种入此过饱和溶液中，待其出现结晶后过滤备用。

3．1%三氯化铁溶液 称1g三氯化铁(FeCl₃·6H₂O)溶于水并稀释至100m1。

4．单宁酸标准溶液 溶解单宁酸50．0mg于500ml容量瓶中(单宁酸应先在105℃烘2h)，并稀释至刻度，每次测定时要现用现配，此为100ppm母液。

(二)测定步骤 取高粱粒(带种皮)10．00－20．00g，于250m1三角瓶中(称量视单宁含量而定)，加水50ml，置60℃左右的恒温箱中过夜，次日将清液过滤至250m1容量瓶中，样品残渣中加入30m1热水。再置80℃左右水浴中提取20min，将清液再过滤到原250m1容量瓶中。再加30ml热水，置80℃左右提取20min，依此重复3－4次，直至溶液与1%三氯化铁作用不生成绿色或蓝色产物止。冷却定容。静置过夜或取一部分离心备用。

吸取上述1－2ml(视单宁含量而定)，置于盛有70m1水的100ml容量瓶中，加5m1F-D试剂与10m1饱和碳酸钠溶液。定容摇匀。30min后在760或650nm波长处读取吸光度。在工作曲线上查出相应单宁ppm数。同时以蒸馏水做空白。样品ppm数减去空白ppm数后再行计算。

工作曲线绘制：吸取100ppm单宁酸标准液0，1，2，4，6，8m1，分别置于已盛有70m1水的100m1容量瓶中，同样品待测液测定步骤，比色读取吸光度。此系列标准液浓度为0，1，2，4，6，8ppm。绘制工作曲线。

(三)结果计算

式中：ppm——待测液扣除空白后的单宁酸浓度；

W——样重(g)；

A——显色时所取待测液体积(m1)。

(四)注释

①市售单宁酸试剂含有一定水分。故应烘燥。否则应另取一部分作水分测定，然后按试剂中实际水分含量来校正其纯度，确定单宁酸的称量。

②所有提取单宁的温度，必须控制不超过80℃，否则，样品中淀粉将溶出，影响过滤。

③单宁与磷钼酸—钨酸钠反应生成的蓝色物质，在760nm处有最大吸光度，如用72型分光光度计则可在650nm处测读吸光度，但灵敏度稍低。