链球菌发酵类型检查及乳酸纸层析分析法

---

一、发酵类型检查

培养基：蛋白胨 5g

牛肉膏 5g

吐温80 0．5ml

酵母膏 5g

葡萄糖 10g

蒸馏水 1000ml

各成分溶解后，调pH值为6．8～7．0，再加入1．6%溴甲酚紫液1．4ml，分装后各管中加入一个小玻管，倒置于培养基中，8磅30min灭菌。灭菌时注意排尽小玻管中空气，否则会影响结果。然后接种待检的菌株，置37℃恒温下培养观察3～5天，产酸时培养基颜色由紫变黄，如小玻管中有气泡出现，表示为异型发酵，小玻管中无气泡产生者为同型发酵。为了确定发酵液中是否产生乳酸，可以用纸层析法分析。

二、乳酸的纸层析法

1．展开剂水、苯甲醇、正丁醇以1∶5∶5的量相混合，然后加1%的甲酸。

2．显色剂0．04%的溴酚蓝酒精溶液，用0．1mol／LNaOH调节pH到6．7。

可用国产新华1号滤纸。在滤纸下方距边约3cm处划一始线，每隔2．5～3cm划一点点样，并注明样品编号，点样的同时需要用2%乳酸和空白培养液作为平行对照。

用洁净的毛细管或微量进样器取样点样，每点一次样，需用电吹风吹干，每个样品点的次数以样品中酸的含量多少而定。

将点好样的纸放入层析缸中，用展开剂饱和一夜后，再添加展开剂开始层析，一般上行25cm即可。取出晾干后喷上显色剂，观察是否出现黄色斑点，并与乳酸对照比较，以确定其是否乳酸。