铜盐沉淀法测纯蛋白质

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本法测定的含氮物质不包括非蛋白质物质。因此通过蛋白质换算因素而得的是纯蛋白质%。

(一)试剂配制

1．6%硫酸铜 60gCuSO₄·5H₂O溶于1L水中。

2．1．25%氢氧化钠 12．5gNaOH溶于1L水中。

3．其它试剂同第二十二章第一节中硫酸-混合盐消煮法及蒸馏法。

(二)测定步骤 称取1．000－2．000g经0．42mm孔径的风干样品，于150ml烧杯中，加约50ml热水，放入．40－50℃的水浴上加热10min。烧杯内物质还未冷时，随即加25ml6%硫酸铜溶液，然后一边搅拌，一边缓缓注入25ml1．25%氢氧化钠溶液。如此形成的碱式硫酸铜〔CuSO₄·Cu(OH)₂〕，将使样品中的蛋白质沉淀。可用石蕊试纸在烧杯中检查，溶液不应是碱性反应。因为碱性反应会引起凝结的蛋白质溶解。放置0．5－1h(也可放置过夜)，用倾泻法过滤，即将沉淀上部液体沿玻棒倒到漏斗中，沉淀留在烧杯中用热水洗几次，而后将沉淀不使损失地移至漏斗上，并继续用热水洗至滤液遇5%氯化钡不再产生硫酸钡白色沉淀为止。此时间接指示非蛋白质含氮物已被洗净。

将带有沉淀的漏斗在50－60℃烘干，直到失去大部分水，将滤纸及内容物从漏斗上取下，并卷成筒状，毫无损失地移入．250ml开氏瓶中，用量筒加入浓硫酸20－30ml，放置2h或过夜。加入1∶10硫酸铜—硫酸钾5g，倾斜置于电炉上先用小火加热，逐渐升温(避免黑色物升于瓶颈或溅于瓶外)，直至出现白色蒸气后才可加大火力使沸腾，消煮至溶液呈透明的淡绿色，再消煮30min。取下凯氏瓶，冷却，用蒸馏水将消煮液一起洗入250ml容量瓶中，冷却至室温后，用水定容。摇匀。

吸取5－10ml待测液用半微量法测氮(含氮约0．5－1mg)。用普通定氮装置时，可吸取25－50ml(含氮约10－20mg)。测定同时作空白试验。

(三)注释 所获蛋白质沉淀不必烘至过干，以免沉淀发脆，塞入开氏瓶时容易损失。只须烘至将滤纸卷成筒状而无水分渗出即可。

表26-4 各种作物收获物中蛋白质的含量范围(干重%)