葡萄糖的测定(氧化酶法)

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葡萄糖氧化酶能专一地使葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时产生等当量的过氧化氢，它在过氧化氢酶作用下使一种无色染料隐色体——邻联甲苯胺形成一种有色化合物，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比关系，从而可以求出样品中的葡萄糖的含量。因酶具有高度专一性，只分解葡萄糖，所以可在其它糖存在的情况下对葡萄糖进行测定。

试剂

(1)1%邻联甲苯胺溶液：称1克邻联甲苯胺，溶解于100毫升无水乙醇，贮于棕色瓶中。

(2)葡萄糖氧化酶(Miles Laboratori es Inc)：贮于4℃。

(3)过氧化物酶：取辣根过氧化物酶10毫克溶于10毫升水中。4℃可保存两周。

(4)醋酸缓冲液(pH5)：吸取8．7毫升冰醋酸加水稀释至1000毫升，此液为0．15N醋酸溶液；再称取20．4克醋酸钠加水定容为1000毫升，此液为0．015N醋酸钠溶液。将前者300毫升和后者溶液700毫升配制成pH5的醋酸缓冲液。可用pH酸度计用前两种酸碱溶液调节其pH值。

(5)邻联甲苯胺试剂：取150毫升醋酸缓冲液、1毫升葡萄糖氧化酶溶液、1毫升过氧化物酶溶液、1毫升1%邻联甲苯胺溶液，混合后4℃保存，可存放1个半月。

(6)0．3%安息香酸溶液：称0．3克安息香酸溶于100毫升水中。

(7)标准葡萄糖溶液：称100毫克干燥的葡萄糖溶于100毫升0．3%安息香酸溶液中使成1毫克／毫升。

操作步骤

1．样品处理：取空白管、标准管和测定管各一支，①空白管加蒸馏水1毫升。②标准管加标准葡萄糖溶液1毫升。③测定管加待测样品1毫升。

待测样品液一般需要离心，3000转／分离心10分钟，含糖量控制在400～600微克／毫升。

向以上三支试管中每间隔半分钟依次各加入邻联甲苯胺试剂5毫升，立即混和并准确反应10分钟(最好在超级恒温水浴中，37℃保温)，在波长625nm处，仍以每间隔半分钟，分别测其光密度值，以空白管作比色时的对照。

2．计算：