荧光抗体技术

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(1)材料

①组织切片、病毒组织培养物、细菌悬液或蛋白质抗原溶液等。

②95%乙醇。

③0．01M pH7．2 PBS。

④抗血清。

⑤FITC标记羊抗兔IgG。

⑥FITC标记兔IgG或鸡IgG(均为特异性IgG)。

⑦荧光显微镜。

(2)操作 荧光抗体的染色方法有直接法和间接法等。

【直接法】

①细菌悬液或细菌感染组织或蛋白抗原可在玻片上进行涂片或触片，用笔圈上吹干。

②固定标本：将玻片放入95%乙醇中室温固定5－10分钟，用PBS冲洗、吹干。

③滴加FITC标记的特异性兔IgG或鸡IgG，37℃染色30分钟。

④冲洗、干燥封片镜检。

【间接法】

①病毒感染组织可进行冷冻切片，病毒细胞培养物可进行涂片，用笔圈上，吹干。

②固定标本：(同于直接法)。

③滴加抗血清于样本部位，室温下或37℃作用30分钟，然后用PBS冲洗，依次用同样的三杯PBS液浸泡5分钟，取出晾干。

④滴加按效价稀释的FITC－羊抗兔IgG，37℃染色30分钟。

⑤冲洗、干燥封片镜检。

⑥无论直接法还是间接法都应设立阳性和阴性对照。

【结果判定】：阳性反应可见到黄绿色的荧光，阴性者不发出荧光。

(3)注意事项

①本试验易出现非特异性荧光，因此在冲洗时应按规程彻底进行。同时设立阴性与阳性对照。

②切片宜薄不易厚，涂片也不应太厚。

③阳性反应一般都可见到固定的细菌或病毒的荧光染色特征，参照有关材料做出正确判断。

(4)应用 荧光抗体技术广泛应用于多种家禽疾病的快速诊断。目前主要用于以下几种疾病的检测。

①荧光抗体直接法检测IBDV抗原。

②IBV抗原的快速检测。

③ILTV抗原的快速检测。

④AEV抗原的快速检测。

⑤禽痘病毒抗原的快速检测。

⑥间接法检测网状内皮增生病的抗体。

⑦CAA抗原或抗体的检测。

⑧禽霉形体、禽霍乱、鸡传染性鼻炎等病原菌的抗原或抗体的检测。