引发软下疳的病原体为杜克雷嗜血杆菌，由Ducrey于1889年发现，该菌长1．0～1．5微米，宽约0．5微米，呈球杆状或卵圆形，两极染色，常呈直线平行排列，形成所谓“指纹状”或“鱼群状”。在病损中，杜克雷嗜血杆菌常位于多形核白细胞和巨噬细胞内，也可以成群游离在间质中。杜克雷菌革兰氏染色呈阴性，无芽孢，无动力。
杜克雷嗜血杆菌培养较困难，培养基中需加入新鲜血液才能生长。培养24小时后可以见到直径为0．5～1．0毫米的菌落。培养2～8日后直径可达2毫米。菌落扁平，中央略突起，灰白色，闪光，表面光滑，边缘整齐。杜克雷菌的生长需较多量的氯化高铁血红素，有些菌株的生长还需要半胱氨酸、淀粉和白蛋白。
杜克雷菌无特殊抵抗力，加热至55℃一小时能将其杀死。在0．5%石炭酸中短时间即死亡。但耐寒能力较强。