滤纸片扩散法

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一、滤纸片的准备

选用优质滤纸(如新华1号定性滤纸)，用5号或6号铅字涂以黑色油墨，印上药物名称，再用打孔机打成直径为6mm的圆纸片，各数100片为一组放入试管中，121℃20min灭菌，烘干。

二、药液的配制

常用药物的配制方法及所用浓度(表8-5)。

表8-5 药物滤纸片的制备及含药浓度

注：干燥抗菌药物滤纸片有商品供应(上海医学化验所)。测定联合药敏试验的滤纸条需自制。

三、含药滤纸片的制备

将灭菌滤纸片用无菌镊子摊布于灭菌平皿中，每100片加药液1ml，不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，于37℃温箱中烘干，时间不宜过长，以免某些抗菌药失效。贮于青霉素小瓶中，置冷暗干燥处保存。

四、培养基选择

同试管稀释法(将液体培养基制成固体培养基即成)。

五、菌液准备

同试管稀释法(但原液不再进行稀释)。

六、试验方法

1．用无菌棉拭，沾取少量菌液，均匀涂布于合适的平板培养基上；待稍干后，用无菌镊子将各种药敏纸片分别平贴在平板培养基表面，每一平板大约可贴4～6种药敏纸片，纸片之间应保持一定距离。

2．置37℃培养8～12h，观察结果。

七、结果观察和报告

观察药敏纸片周围有无抑菌圈，用透明尺或卡尺量取抑菌圈直径(包括滤纸片)大小，参照表8-6，报告试验菌对药物的敏感度。

表8-6 各种抗菌药物的抑菌圈与敏感标准