改良的双缩脲法——平克尼(Pinckney)法

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该法是直接应用于小麦面粉等固体样品的改良法。可直接测定样品的蛋白质含量。小麦粉中的蛋白质可以一边抽提，一边定量。

在双缩脲反应中使用的碱性酮溶液中的铜，易生成氢氧化物而沉淀，作为铜的稳定剂、酒石酸钾钠效果较甘油好。

试剂

(1)甘油稳定剂：在937毫升蒸馏水中，加入10毫升10NKOH和3毫升甘油，之后一面激烈地搅拌，一面缓慢地加入4%硫酸铜50毫升。

(2)酒石酸钾钠稳定剂：在930毫升蒸馏水中，加入10毫升10N的KOH和20毫升25%酒石酸钾钠溶液，激烈搅拌，同时加入40毫升4%硫酸铜溶液。

配制以上两种溶液时，应无沉淀生成，否则重配。

操作方法

1．样品测定：如用试剂(1)，可称0．60克样品，如用试剂(2)则称0．50克样品。

将样品置80毫升离心管中，加入1毫升四氯化碳，混合，再加入40毫升试剂(1)或(2)。塞紧塞子激烈振荡10分钟后，放置1小时，充分混合后离心。4000转／分离心10分钟，至完全透明，取上清液5毫升，定容于10毫升容量瓶中，于721型分光光度，波长550nm处测定光密度，从标准曲线上查出蛋白质含量。

2．标准曲线的制作：取一种已知蛋白质含量的样品液作为标准(一般用凯氏定氮法测定其蛋白含量)。取6个10毫升容量瓶，编号后，分别加入0，2．0，4．0，6．0，8·0，10·0毫升的样品标准液于容量瓶中，并定容至10毫升。按照样品测定方法，测其光密度，以蛋白质含量为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线。

3．计算

式中：C：从标准曲线上查得的蛋白质含量(毫克)；

W：测定样品液时相当于样品重量(毫克)。

〔注〕本法适用于饲料、谷类、豆类、油料等蛋白质含量的测定，当样液中含多糖或肽中含脯氨酸较多时，显色受影响。