制造培养基的步骤与方法

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【称取原料】根据不同细菌生长繁殖的要求，准确称取培养基的各种原料，置于烧杯中，加入一定量的蒸馏水，混合。

【加热溶解】将烧杯放在电炉上，加热溶解(为避免破坏溶解的物质，在电炉上放一石棉网)，也可用水浴锅或微波炉加热溶解。

【调整培养基的酸碱度(pH值)】取已经溶解的培养基，根据不同细菌对酸碱度的要求，来调整培养基的pH值，测pH值可用标准比色管法，也可用pH计，后者更为简便、快速。

【澄清】为了除去杂质，使培养基透明清朗，应进行过滤处理。液体培养基可用滤纸漏斗直接过滤。固体培养基可用纱布棉花和漏斗直接过滤，此法操作要快，否则琼脂会凝固。

【分装】用漏斗过滤时，可直接将滤出的培养基分装子试管或三角瓶内。分装时要注意，不要将培养基沾满管(瓶)口，以免棉塞沾上培养基而增加污染机会，最好将玻管放入试管以内约1／3或1／2处注入培养基，肉汤或斜面琼脂培养基，每管约3－5毫升。之后加棉塞，并用3－4层报纸将棉塞处扎紧。

【灭菌】分装并包扎好的培养基，根据培养基成分的耐热与否，分别进行高压(15磅)、低压(10磅)灭菌，以使培养基内无任何活细菌细胞。

灭菌好的培养基，如果是斜面琼脂，趁热斜置于木棒上。使呈适当斜度，凝固后即可使用。如为半固体培养基，灭菌后，使其直立凝固即成。如为平板用琼脂，待冷至60℃左右以右手拿着试管或三角瓶，以无菌操作用左手小拇指和无名指拔去棉塞，管口或瓶口在火焰上灭菌，然后用左手打开灭菌平皿的盖(开盖大小以能容纳管口为宜)，右手将琼脂培养基倾入平皿底内，其量约为10－15毫升，合上盖，待琼脂凝固后，将平皿翻转(即盖在下面，底朝上)，以免凝集水从盖上滴到培养基中，影响使用。可任选1－2个平板放在37℃温箱中，培养24小时。若无污染即可使用。