传代细胞的培养方法也适用于二倍体细胞株和继代细胞的培养。传代细胞系种类繁多，但培养方法基本相同，生长液都用Eagle氏MEM，维持液也用Eagle氏MEM或199，血清量稍有加减。
1．传代时将培养液弃去，细胞单层用Hank氏液(pH7．4)洗1次，再用胰酶液洗1次。
2．加胰酶液或胰酶-EDTA混合液(37℃)覆盖细胞单层，在37℃培养。
3．每隔3min在倒置显微镜下观察，如见细胞开始收缩，细胞间隙扩大，或单层边缘开始卷起，此时将培养瓶倒置，在37℃继续培养几分钟。
4．将胰酶液倾去，并将残液吸尽。
5．加入生长液，用量为原来的1～3倍，视单层细胞的密度而定。
6．用吸管吹吸，使细胞分散均匀。
7．分装培养瓶，每次传代可扩大1～3倍。
8．37℃培养1～2天即长成单层，这时可接种病毒，换用维持液。也可每隔5～7天传代扩大。