L－α－天门冬氨酸－N－(2，2，4，4－四甲基－3－硫化三亚甲基)－D－丙胺酰胺(阿力甜)

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结构式：

分子式：C₁₄H₂₅N₃O₄S·2．5H₂O

相对分子质量：376．5

一、阿力甜的鉴别

1．试剂和溶液

1．1 茚三酮。

1．2 正丁醇。

1．3 冰乙酸。

1．4 0．001mol／L(KMnO₄)溶液。

2．操作步骤

2．1 取5mL0．3%茚三酮－正丁醇溶液及2mL冰乙酸，加10mg样品，加热，产生深蓝紫色。

2．2 取5mL(新配制)0．001mo1／L(KMnO₄)溶液，加10mg样品混合，溶液由紫色变棕色。

二、阿力甜的含量测定

1．原理

阿力甜，它的β－异构体和丙氨酸酰胺，可用反相离子对HPLC检测，用外标法对比。

2．试剂和溶液

2．1 乙腈 色谱纯。

2．2 磷酸二氢钠。

2．3 l－辛磺酸钠(1－Octanesulfonic Acid Sodium Salt)。

2．4 磷酸。

2．5 阿力甜标准品。

2．6 β－异构体标准品。

2．7 丙氨酸酰胺标准品。

2．8 标准溶液 准确称取β－异构体和丙氨酸酰胺各25mg，移至500mL容量瓶中，用50mL甲醇助溶，用蒸馏水稀释至刻度，此液为贮备液A1，贮存于冰箱。

取15mL储备液A1移入50mL容量瓶，用水稀释至刻度，此液为储备液A2。

精确称50mg阿力甜标准品，移入10mL容量瓶，加5mL储备液A2，有水稀释至刻度，此液为工作标准液W1。取5mLW1用蒸馏水稀释至50mL，此液为工作标准液W2。

3．测定方法

3．1 HPLC参考条件。

流速：1mL／min；

样品量100μL；

检测波长：217nm；

检测灵敏度：0．01AUFS；

积分仪衰减：64；纸速：0．5cm／min；

出峰时间：20min。

3．2 样品测定 精确称取50mg阿力甜样品，移至10mL容量瓶，用水溶解稀释至刻度，标记为S1，吸取5mLS₁用水稀释至50mL，标记为S₂。

开机后，待柱平衡后，取溶液W₁进样3次，计算β－异构体和丙氨酸酰胺平均峰面积。取标准液W₂进样3次，计算阿力甜平均峰面积。

取阿力甜样品S1溶液，进样3次，计算β－异构体和丙氨酸酰胺平均峰面积；取阿力甜样品S2溶液，进样3次，计算阿力甜的平均峰面积。

4．分析结果的表述

按式(11－16)计算样品中阿力甜质量分数(w)及其杂质含量。

式中 m_std——校正水分含量的参比标准品质量

P_std——参比标准品的纯度(100．00－不纯物总量)

R_std——标准液中分析峰的响应值

m_smp——水分含量校正后样品质量

R_smp——样品液中分析峰的响应值

D．F．——稀释因子

计算β－异构体和丙氨酸酰胺质量分数(w)公式如下：

式中 m_std——参比标准质量(未校正水分)

m_smp——样品质量(未校正水分)

P_std，R_std和R_smp——定义同上

D．F．——稀释因子

表11－1

注：典型峰保留时间。