(5)棉籽、植株和土壤中残留量检测方法(方法一)

---

农业部农业环境质量监督检验测试中心(济南) 孙桂兰 阚建军 许志强 武玉奎

土壤用二氯甲烷提取，植株、棉籽用甲醇提取，液-液分配，SPE-C₁₈柱净化，液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

旋转蒸发器

水浴振荡器

超声波清洗器

2．主要试剂

乙腈(色谱纯)、石油醚(60～90℃)、二氯甲烷、乙酸乙酯(重蒸馏)、浓盐酸、二次重蒸水、氯化钠、无水硫酸钠

SPE-C₁₈柱 500mg／5mL

吡虫啉标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 土壤

称取20g过40目筛的风干土样，置于500mL平底三角烧瓶中，用50mL、40mL、30mL二氯甲烷超声波提取(分别为15min、10min、5min)3次。合并提取液，用旋转蒸发器(50℃)浓缩至3～4mL，氮气吹干，用流动相定容5mL，待测。

3．1．2 棉籽、棉株

称取10g脱绒后粉碎的棉籽或切碎的植株，置于500mL平底三角烧瓶中，加120mL甲醇／水(3∶1，V／V)，浸泡1h(植株样本另需组织捣碎2min并用30mL甲醇／水冲洗容器)，振荡提取30min，过滤。滤渣再用80mL甲醇振荡30min，过滤。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

合并滤液于500mL分液漏斗中，加入100mL5%氯化钠溶液，用100mL石油醚，振摇洗涤。收集水相于另一分液漏斗中。石油醚相用5%氯化钠溶液50mL反萃取1次，弃去石油醚相。合并水相，加入0．5mL6mol／L盐酸，用50mL、50mL、25mL二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，用无水硫酸钠脱水，用旋转蒸发器减压浓缩至近干，再用氮气吹干，待柱净化。

3．2．2 柱净化

取SPE-C₁₈柱，用10mL甲醇预淋，至干，再用二次重蒸水预淋，至干。样本用10mL石油醚／乙酸乙酯(9∶1，V／V)溶解，分3次转到柱中，淋出液弃去。用石油醚／乙酸乙酯混合液(3∶7，V／V)洗脱，收集10mL洗脱液，用氮气吹至近干，用甲醇定容至10mL，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 UV

波长 270nm

色谱柱 Agilent Extend-C₁₈，250mm×4．6mm×5μm

流动相 乙腈／水(40∶60，V／V)

流速 1．0mL／min

进样量 20μL

保留时间 4．0min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．1×10^－9g。

最低检测浓度 棉籽和植株均为0．03mg／kg，土壤0．01mg／kg。

回收率 棉籽、植株和土壤中添加吡虫啉0．05～1．00mg／kg时，平均回收率分别为82．5%～91．4%、80．7%～88．2%和85．4%～92．0%。见表1-21-8。

相对标准偏差 3．3%～6．8%，见表1-21-8。

表1-21-8 棉花和土壤中吡虫啉添加回收率及相对标准偏差实验结果