(4)葡萄和土壤中残留量检测方法

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中国农业科学院茶叶研究所 罗逢健 刘光明 黄雅俊 柯昌强 王运浩 陈宗懋

一、代森锰锌残留量检测

样本与氯化亚锡-盐酸溶液反应，产生二硫化碳，气相色谱法(FPD-S)测

定二硫化碳的量，计算样本中代森锰锌的含量。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 火焰光度检测器(FPD-S)

高速组织捣碎机

恒温水浴锅

反应瓶 300mL医用葡萄糖瓶，翻口胶塞内装气相色谱用硅橡胶垫，胶塞外面用聚四氟乙烯生料带包好。

2．主要试剂

丙酮、二硫化碳、氯化亚锡、盐酸

5mol／L盐酸 43mL浓盐酸，用水稀释到100mL

氯化亚锡-盐酸溶液 称取3．6g氯化亚锡(SnCl₂·2H₂O)溶于适量5mol／L盐酸中，再用5mol／L盐酸稀释到200mL，放冰箱中备用。

二硫化碳标准液 在100mL容量瓶中加入少量丙酮，再取0．79mL二硫化碳(比重1．263)加入瓶中，用丙酮定容到刻度，为10mg／mL母液。取1mL母液用丙酮稀释10倍，为1mg／mL标准液，放冰箱中备用。

代森锰锌标准品

3．检测步骤

3．1 二硫化碳标准曲线的建立

300mL反应瓶中加入50mL蒸馏水，用胶塞密封。用微量进样器取10μL1．0mg／mL的二硫化碳标准溶液注入瓶中。在80℃水浴上加热1h，抽取反应瓶顶空气体15μL、20μL、25μL、30μL、35μL进行气相色谱测定。以二硫化碳的峰面积-进样量绘制标准曲线。

3．2 二硫化碳产率的测定

称取0．0125g代森锰锌标准品于250mL烧杯中，加入100mL蒸馏水，搅拌均匀。移取10mL到另一100mL容量瓶中，加水定容至刻度，为10μg／mL标准溶液。立即从中移取2mL加到反应瓶中，加入50mL氯化亚锡-盐酸溶液，加胶塞密封，在80℃水浴上加热，每隔约15min振摇1次。2h后，测定顶空气体中二硫化碳的量，求得代森锰锌生成二硫化碳的产率。

3．3 样本反应

3．3．1 葡萄

称取20．0g冰冻的葡萄匀浆样本，放入反应瓶中，加入40mL氯化亚锡-盐酸溶液，加胶塞密封，在80℃水浴上加热，每隔约15min振摇1次。2h后，抽取反应瓶顶空气体，测定。

3．3．2 土壤

称取10．0g样本放入反应瓶中，加10mL蒸馏水，再加入60mL氯化亚锡-盐酸溶液，以下操作同葡萄。

3．4 气相色谱法测定

检测器 FPD-S

色谱柱 3mmi．d．×2m玻璃柱，5%SE-30／ChromosorbWHP(80～100目)

检测温度 柱温65℃；进样口120℃；检测器150℃

载气 高纯氮，50kPa

燃烧气 氢气80kPa，空气175kPa

进样量 40μL

保留时间 1．6min(CS2)

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 2×10^－10g(CS₂)。

最低检测浓度 代森锰锌在葡萄中0．02mg／kg，土壤中0．04mg／kg。

回收率 葡萄和土壤中添加代森锰锌0．11～1．10mg／kg时，平均回收率分别为91．3%～92．0%和84．1%～93．2%，见表2-20-9。

相对标准偏差 1．1%～6．8%，见表2-20-9。

表2-20-9 葡萄和土壤中代森锰锌添加回收率及相对标准偏差实验结果

二、乙撑硫脲(ETU)残留量检测

样本用甲醇／水提取，液相色谱法(DAD)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 二极管阵列检测器(DAD)

旋转蒸发器

2．主要试剂

甲醇(色谱纯)、二氯甲烷(重蒸)、甲醇(重蒸)、氯化铵、氟化钾(KF·2H₂O)、无水硫酸钠、助滤剂Celite545、磷酸、去离子水

提取剂 甲醇／水(3∶1，V／V)

萃取剂 二氯甲烷／甲醇(9∶1，V／V)

ETU标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 葡萄

称取20．0g葡萄匀浆样本，加入150mL提取剂，匀浆提取3min，用铺有一层滤纸及Celite545的布氏漏斗抽滤。用30mL提取剂洗滤渣。合并滤液，用旋转蒸发器(60～65℃)浓缩至5mL左右。

3．1．2 土壤

称取20．0g样本，放入250mL三角瓶中，加入150mL提取溶剂，浸泡过夜，用加双层滤纸的布氏漏斗抽滤，余下操作同葡萄。

3．2 净化

将上述滤液转入500mL分液漏斗中，用5mL蒸馏水清洗浓缩瓶，并入分液漏斗，加入20．0g氟化钾和0．6g氯化铵，振摇使充分溶解。加入100mL×2萃取剂萃取。合并萃取剂相，用旋转蒸发器(40～50℃)浓缩至干，加入5mL水溶解蒸残物，待测。

3．3 液相色谱法测定

检测器 DAD

波长 240nm

色谱柱 HYPERSIL BDS C₁₈，4．6cm×25cm×5μm

柱温 30℃

流动相 A，磷酸／水(1∶1000，V／V)；B，甲醇

流动相梯度程序：

流速 0．8mL／min

进样量 20μL

保留时间 4．4min

4．结果计算

外标(峰高)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1×10^－9g。

最低检测浓度 葡萄和土壤均为0．05mg／kg。

回收率 葡萄和土壤中添加ETU0．06～0．62mg／kg时，平均回收率分别为90．9%～96．9%，85．6%～95．2%。见表2-20-10。

相对标准偏差 3．0%～14．1%，见表2-20-10。

表2-20-10 葡萄和土壤中ETU添加回收率及相对标准偏差实验结果