黄瓜、豇豆和土壤中残留量检测方法(方法二)

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安徽化工研究院化工部农药工程技术中心 王美瑜 李占山 陈引风

样本用丙酮水溶液提取，石油醚／乙腈液-液分配，衍生化，液相色谱法(FD)测定。

1．主要仪器及设备

液相色谱仪 荧光检测器(FD)

匀浆机

旋转蒸发器

恒温水浴锅

2．主要试剂

丙酮、乙腈、石油醚、氯化钠、28%氨水、N，N-二甲基甲酰胺、1-甲基咪唑、三氟乙酸酐、二甲基二氯硅烷

阿维菌素标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 黄瓜、豇豆

称取200g切碎的样本，匀浆后取20g，加100mL1∶1丙酮水溶液，振荡提取2h。静置、过滤，用100mL1∶1丙酮水溶液分数次洗涤滤渣，过滤。合并滤液。

3．1．2 土壤

称取20g样品于250mL三角烧瓶中，加100mL1∶1丙酮水溶液，浸泡过夜，超声波振荡提取10min。静止沉降，过滤上清液。用50mL1∶1丙酮水溶液洗涤滤渣，抽滤。合并滤液。

3．2 净化

将滤液移至500mL分液漏斗中，加10g氯化钠，用50mL×2石油醚萃取，每次1min，弃去水相。合并石油醚相，用50mL×2乙腈液-液分配，弃去石油醚相。在乙腈相中加入200mL水和5g氯化钠，用50mL×2石油醚萃取，合并石油醚相，经5g无水硫酸钠柱脱水后，用旋转蒸发器(65℃)浓缩至近干。用6mL石油醚分3次溶解残余物并转移至经硅烷化处理的具塞刻度试管中。

3．3 衍生化

3．3．1 衍生化试剂配制

衍生化试剂A：10mL具塞刻度试管中加入3．6mLN，N-二甲基甲酰胺，再加入0．4mL1-甲基咪唑，混匀。放入水浴中冷却2min后，缓缓加入0．6mL三氟乙酸酐，摇匀。本试剂在每次衍生化时需重新配制。

衍生化试剂B：在5mL具塞刻度试管中加入3．0mL甲醇，而后加入0．2mL28%氨水，摇匀备用。

3．3．2 衍生化反应

将样品置于65℃油浴上蒸干，加入0．2mL衍生化试剂A，充分摇动后，置于30℃油浴上反应1h，并不时摇动。取出后，再向其中加入0．1mL衍生化试剂B，摇匀。置于30℃油浴上反应30min，冷却至室温。加入1．0mL甲醇、2．0mL水、2．0mL乙酸乙酯后摇匀。分层后取乙酸乙酯层用液相色谱法测定。阿维菌素标样系列与样品同时衍生化。

3．4 液相色谱法测定

检测器 FD

波长 Ex365nm，Em475nm

色谱柱 Hypereil，100mm×2．1mm

柱温 40℃

流动相 甲醇／水(95∶5，V／V)

流速 0．6mL／min

进样量 10μL

保留时间 2．1min

4．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1×10^－10g。

最低检测浓度 黄瓜、豇豆和土壤均为0．001mg／kg。

回收率 黄瓜、豇豆、土壤中添加阿维菌素0．005～0．10mg／kg时，平均回收率为82．2%～94．4%。见表1-1-2。

相对标准偏差 3．2%～10．1%，见表1-1-2。

表1-1-2 黄瓜、豇豆和土壤中阿维菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果