(2)大豆籽粒和土壤中残留量检测方法

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吉林农业大学资源与环境学院 逯忠斌 张浩 王岩 徐威

样本用甲醇水溶液提取，液-液分配，硅胶柱层析净化，高效液相色谱法(UV)测定。

1．主要仪器及设备

高效液相色谱仪 紫外检测器(UV)

组织捣碎机

谷物粉碎机

振荡机

旋转蒸发器

层析柱 Φ12mm×150mm

2．主要试剂

甲醇(紫外光谱纯)、三氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚、无水硫酸钠、氯化钙、硅胶、活性炭、助滤剂

喹禾糖酯标准品

3．检测步骤

3．1 提取

3．1．1 大豆、土壤

称取20g粉碎后的大豆样本(土壤样本40g)，置于具塞锥形瓶中，加入70mL甲醇／水(80∶20，V／V)，振荡提取20min，用铺有助滤剂的布氏漏斗中减压抽滤。用40mL甲醇／水(80∶20，V／V)溶液冲洗锥形瓶及滤渣，合并滤液。

3．2 净化

3．2．1 液-液分配

将合并后滤液移入分液漏斗，加入5%氯化钙溶液150mL(土壤样本加120mL)，用50mL、40mL、40mL三氯甲烷萃取3次。合并三氯甲烷相，经过无水硫酸钠脱水，用旋转蒸发器(40℃)减压浓缩至1mL，待柱层析净化。

3．2．2 柱层析净化

在层析柱内依次加入1g助滤剂、2g硅胶、0．5g助滤剂／活性炭(20∶1，W／W)及少许无水硫酸钠，用70mL乙酸乙酯／石油醚(95∶5，V／V)淋洗并洗脱。弃去前5mL，收集后65mL洗脱液，用旋转蒸发器(40℃)减压浓缩至干，用甲醇定容至1mL，待测。

4．液相色谱法测定

检测器 UV

检测波长 240nm

色谱柱 C₁₈柱，25cm×4．6mm

流动相 甲醇／水(80∶20，V／V)

流速 0．7ml／min

进样量 5μL

保留时间 10．7min

5．结果计算

外标(峰面积)-标准曲线法定量

6．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 1．0×10^－9g。

最低检测浓度 大豆籽粒0．01mg／kg，土壤0．005mg／kg。

回收率 大豆籽粒和土壤中添加喹禾糖酯0．01～1．00mg／kg，平均回收率分别为87．1%～88．9%和85．8%～87．2%。见表3-35-2。

相对标准偏差 0．7%～2．9%，见表3-35-2。

表3-35-2 土壤、大豆籽粒中喹禾糖酯添加回收率及相对标准偏差实验结果